同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)(iTRAQ)
(1)技術(shù)原理
iTRAQ(Isobaric tag for relative and absolute quantitation)是一種新的、功能強(qiáng)大的可同時(shí)對(duì)四種樣品進(jìn)行絕對(duì)和相對(duì)定量研究的方法。iTRAQ試劑為可與氨基酸N端及賴氨酸側(cè)鏈連接的胺標(biāo)記同重元素(isobaric)。在質(zhì)譜圖中,任何一種iTRAQ試劑標(biāo)記的不同樣本中的同一蛋白質(zhì)表現(xiàn)為相同的質(zhì)荷比。而在串聯(lián)質(zhì)譜中,信號(hào)離子表現(xiàn)為不同質(zhì)荷比(114~117)的峰,因此,根據(jù)波峰的高度及面積,可以得到蛋白質(zhì)的定量信息。
(2)技術(shù)應(yīng)用
機(jī)理和調(diào)控機(jī)制研究,動(dòng)態(tài)過程中機(jī)制研究 ;疾病標(biāo)志物的篩選,用藥及預(yù)后標(biāo)志物篩選。
【服務(wù)內(nèi)容】
蛋白提取及定量;iTRAQ試劑標(biāo)記;液相分離、質(zhì)譜鑒定;數(shù)據(jù)庫(kù)檢索和數(shù)據(jù)分析;生物信息學(xué)分析。
(1)客戶須明確檢測(cè)目的和具體要求,最好能提供1~2篇文獻(xiàn)或資料。
(2)植物標(biāo)本:將葉片/花/根/莖/果實(shí)剪下,用無(wú)菌雙蒸水洗凈;用錫箔紙包好后放入液氮或者-80℃冰箱保存。
(3)組織標(biāo)本:采集新鮮組織,切為小塊,組織塊用冷的PBS或生理鹽水洗凈。將離心沉淀后的組織塊用錫箔紙包裹,樣本放入液氮或-80℃冰箱中保存,干冰運(yùn)輸。