串聯(lián)親和純化(TAP)-質(zhì)譜鑒定

【技術(shù)簡(jiǎn)介】

（1）技術(shù)原理

串聯(lián)親和純化（tandem affinity purification, TAP）技術(shù)基本原理包括：重組構(gòu)建帶有兩種親和純化標(biāo)簽的融合靶蛋白，然后轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞或組織，帶標(biāo)簽的靶蛋白表達(dá)并結(jié)合上相關(guān)蛋白質(zhì)后，利用標(biāo)簽與相應(yīng)磁珠作用，兩步純化得到相關(guān)蛋白質(zhì)。TAP技術(shù)聯(lián)合質(zhì)譜對(duì)純化后的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析，通過(guò)生物信息學(xué)獲得的蛋白相關(guān)性可信度高，為后續(xù)的驗(yàn)證工作節(jié)省大量時(shí)間。

（2）技術(shù)應(yīng)用

    TAP與質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)用已成為一種高效且實(shí)用的方法，在生物大分子相互作用領(lǐng)域中被廣泛應(yīng)用。近些年，隨著TAP標(biāo)簽的全面改進(jìn)和質(zhì)譜技術(shù)的不斷發(fā)展，TAP-MS的靈敏度與專(zhuān)一性得到很大提高，使得該技術(shù)得以在更多領(lǐng)域發(fā)揮重要作用，也使得我們對(duì)蛋白質(zhì)復(fù)合體進(jìn)行系統(tǒng)性研究成為可能。

【服務(wù)內(nèi)容】

構(gòu)建融合Flag-HA的誘餌蛋白真核表達(dá)載體或者慢病毒載體；載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞或包裝慢病毒感染靶細(xì)胞；TAP純化互作蛋白；質(zhì)譜鑒定互作蛋白。

【客戶(hù)須知及標(biāo)本要求】

（1）客戶(hù)須明確檢測(cè)目的和具體要求，最好能提供1~2篇文獻(xiàn)或資料。

（2）SDS-PAGE條帶：考染，條帶清晰可見(jiàn)；蛋白質(zhì)溶液：蛋白質(zhì)總量>5μg/μl。

（3）蛋白洗脫液：定量并計(jì)算總蛋白量，真空干燥后，密封好管口，冰袋包裝寄送。

（4）蛋白質(zhì)條帶（考染）：從凝膠上割取條帶時(shí)，避免污染，將條帶放入EP管內(nèi)，密封好管口，冰袋包裝寄送。